Prensîbên Senteza Asîdên Nukleîk

Senteza asîda nukleîk bi rêbaza trîglîserîda amîdê sîalîk a qonaxa zexm pêk tê, bi vî rengî dawiya 3' ya ADNyê li ser substratek qonaxek hişk tê bêbandorkirin û nukleotîd di riya 3' ber 5'an de têne zêdekirin heya ku perçeya DNA ya xwestî were sentez kirin. .Ev ji senteza ADNyê bi sepana ADN polymerase cuda dibe.

Di dema sentezkirinê de dawiya 3' ya bingeha yekem li ser CPG tê bêbandorkirin, 5'-OH ya bingeha din bi di-p-tolyl trîtil DMT ve tê parastin, koma amînî ya li ser bingehê bi asîdê benzoîk û 3' tê parastin. Dûv re -OH bi pêkhateyek amino fosfat tê çalak kirin.1 bingehek ji 5 5'-OH ya 1 bingehê û 3'-OH ya bazê din trîglîserîdek fosfît çêdike, ku dûv re bi iyotê tê oksîdekirin û dibe trîglîserîdek fosfat, parastina li ser bingeha duyemîn 5'-OH tê rakirin. Zêdekirina asîda dîkloroacetîk DM bi lêzêdekirina bingeha din re dizivire, û piştî sentezkirinê parastvanê li ser 5'-OH bi asîdek qels tê rakirin. bi hîdroksîda amonyûmê ya konsantrekirî ya di bin germkirinê de, hîdroksîdê amonyûmê tê rakirin, perçe bi valahiya hişk tê zuha kirin, û asîda nukleîk bi kromatografiya şil an PAGE tê paqij kirin.

Gavên Senteza Oligo

Astengkirin

EwKoma parastina DMT ya 5-ê ya dawî bi lê zêdekirina çareseriya TCA tê rakirin.

Activation

Tevlihevkirina aktîvatorê bi monomera oligonukleotidê re da ku navbera monomera oligonukleotîdê ya çalak ava bike.

Coupling

Koma hîdroksîl a 5-termînalê bi navbeynkariya oligonukleotide ya çalak re di reaksiyona kondensasyonê ya dijî-jenerîf de reaksiyonek çêdike û girêdanek trîglîserîdê fosfîtê ya bêîstiqrar çêdike.

Capping 

Zêdekirina ajanek vegirtinê bi komên hîdroksîl ên zêde yên ku beşdarî reaksiyona kondensasyonê ne re reaksiyonek girtina acetilasyonê pêk tîne.

Oksîdasyon 

Zêdekirina çareseriya îyotê ya ku av tê de ye, bi oksîdasyonê bi bendên fosfît ên bêîstiqrar re reaksiyonê dike û bendên trîglîserîd ên asîda fosforîk a stabîl çêdike.

Cîanoethyl Cleavage

Hilbera asîda nukleîk a piştî sentezê, bi lêzêdekirina çareseriya DEA-yê re ji bo rakirina koma cyanoethyl ji girêdana triglycerîdê fosfat.

Cleaved & Parastinê

Parçeyên asîda nukleîk bi lêkirina çareseriyek hîdroksîd amonyûmê ya konsantrekirî ji hilgirê qonaxa zexm têne qut kirin û dûv re tê germ kirin da ku komên parastinê ji bendên hîdrojenê yên bazdan werin derxistin.